陀枪师姐2021粤语督察戴安娜（宣萱 饰）一直安逸于档案管理的后勤岗位，因缘际会跟元祖级陀枪师姐陈三元（滕丽名 饰）、飞虎队男神蒙汉森（陈豪 饰）合力破案后，被上司韦展超（许绍雄 饰）安排加入悬案小组，与一班各有「特色」的警员，在汉森带领下追查外界不关注的悬案。汉森不满安娜而互相斗法，直至揭露安娜因曾被胁持而恐惧用枪，反令二人擦出爱火花！安娜重遇多年前惨遭灭门的补习学生刘达华（罗子溢 饰），他却加入了黑道……在感情与内疚推动下，安娜能否拿回手枪重新振作，成就新一代的「陀枪师姐」？